ⅠNukleiinhapeisissejuhatus
Nukleiinhape jaguneb desoksüribonukleiinhappeks (DNA) ja ribonukleiinhappeks (RNA), mille hulgast jaguneb RNA vastavalt erinevatele funktsioonidele ribosomaalseks RNA-ks (rRNA), messenger-RNA-ks (mRNA) ja ülekande-RNA-ks (tRNA).DNA kontsentreerub peamiselt tuumas, mitokondrites ja kloroformis, RNA aga jaotub peamiselt tsütoplasmas.Geeniekspressiooni materiaalse alusena on nukleiinhapete ekstraheerimisel äärmiselt oluline roll molekulaarbioloogia uuringutes ja kliinilises molekulaardiagnostikas.Nukleiinhappe ekstraheerimise kontsentratsioon ja puhtus mõjutavad otseselt järgnevat PCR-i, sekveneerimist, vektori konstrueerimist, ensüümi seedimist ja muid katseid.
Ⅱ Nukleiinhapete ekstraheerimise ja puhastamise meetod
① Fenooli/kloroformi ekstraheerimismeetod
Fenool/kloroformi ekstraheerimine on klassikaline DNA ekstraheerimise meetod, mille puhul kasutatakse proovide töötlemiseks peamiselt kahte erinevat orgaanilist lahustit, lahustades veefaasis DNA-põhise nukleiinhappe, orgaanilises faasis lipiidid ja kahe faasi vahel valke.Selle meetodi eelisteks on madal hind, kõrge puhtus ja hea mõju.Puuduseks on keeruline töö ja pikk kasutusaeg.
② Trizoli meetod
Trizol meetod on klassikaline RNA ekstraheerimise meetod.Trizol meetod jagatakse pärast tsentrifuugimist kloroformiga vesifaasiks ja orgaaniliseks faasiks, milles RNA lahustatakse vesifaasis, veefaas viiakse uude EP tuubi, pärast isopropanooli lisamist saadakse sade ja seejärel puhastatakse etanooliga.See meetod sobib RNA ekstraheerimiseks loomsetest kudedest, rakkudest ja bakteritest.
③ Tsentrifugaalkolonni puhastamise meetod
Tsentrifuugkolonni puhastusmeetod võib DNA-d adsorbeerida spetsiaalselt spetsiaalsete ränimaatriksi adsorptsioonimaterjalide kaudu, samal ajal kui RNA ja valk võivad sujuvalt läbida ning seejärel kasutada nukleiinhapete ühendamiseks kõrge soolasisaldusega madala PH ja madala soola kõrge PH väärtusega elueerimist nukleiinhappe eraldamiseks ja puhastamiseks.Eelised on kõrge puhastuskontsentratsioon, kõrge stabiilsus, orgaanilise lahusti puudumine ja madal hind.Puuduseks on see, et seda tuleb tsentrifuugida samm-sammult, rohkem tööetappe.
④ Magnethelmeste meetod
Magnethelmeste meetod seisneb rakukoe proovi jagamises läbi lüsaadi, proovis sisalduva nukleiinhappe vabastamise ning seejärel adsorbeeritakse nukleiinhappemolekulid spetsiifiliselt magnethelmeste pinnale, samas kui lisandid, nagu valgud ja suhkrud, jäetakse sisse. vedelikku.Rakukoe lõhestamise, nukleiinhappega magnethelmeste sidumise, nukleiinhappepesu, nukleiinhappeelueerimise jne etappide kaudu saadakse lõpuks puhas nukleiinhape.Eelised on lihtne töö ja lühike kasutusaeg, ilma et oleks vaja astmelist tsentrifuugimist.Sellel on madalad tehnilised nõuded ja see suudab realiseerida automaatset ja massilist tööd.Magnethelmeste ja nukleiinhappe spetsiifiline kombinatsioon muudab ekstraheeritud nukleiinhappe kõrge kontsentratsiooni ja puhtusega.Puuduseks on see, et praegune turuhind on suhteliselt kallis.
⑤ Muud meetodid
Lisaks ülaltoodud neljale meetodile on olemas keev krakkimine, kontsentreeritud soola meetod, anioonse pesuvahendi meetod, ultraheli meetod ja ensümaatiline meetod jne.
Ⅲ Nukleiinhappe ekstraheerimise tüüp
Foregenel on maailma juhtiv Direct PCR platvorm, kaheveeruline RNA eraldamise platvorm (ainult DNA + RNA).Peamised tooted hõlmavad DNA/RNA isolatsioonikomplekte, PCR ja Direct PCR reaktiivide molekulaarlabori reaktiivide seeriat.
① RNA täielik ekstraheerimine
Kogu RNA ekstraheerimise proovid hõlmavad verd, rakke, loomseid kudesid, taimi, viirusi jne. Kogu RNA kõrge puhtusastme ja kontsentratsiooni saab saada kogu RNA ekstraheerimisega, mida saab kasutada RT-PCR-is, kiibi analüüsis, in vitro translatsioonis, molekulaarne kloonimine, Dot Blot ja muud katsed.
Võõrastega seotudRNA isolatsioonikomplektid
Animal Total RNA isolation Kit--Eraldage kiiresti ja tõhusalt kõrge puhtusastmega ja kvaliteetset kogu-RNA-d erinevatest loomsetest kudedest.
Cell Total RNA isolation Kit--Väga puhastatud ja kvaliteetset kogu-RNA-d saab erinevatest kultiveeritud rakkudest 11 minutiga.
Plant Total RNA isolation Kit--Kiiresti ekstraheerige madala polüsahhariidide ja polüfenoolide sisaldusega taimeproovidest kvaliteetset kogu-RNA-d.
Viiruse RNA eraldamise komplekt--Isoleerige ja puhastage kiiresti viiruse RNA proovidest, nagu plasma, seerum, rakuvabad kehavedelikud ja rakukultuuri supernatandid.
② Genoomse DNA ekstraheerimine
Genoomse DNA ekstraheerimise proovid hõlmavad mulda, väljaheiteid, verd, rakke, loomseid kudesid, taimi, viirusi jne. Genoomse DNA ekstraheerimist saab kasutada ensüümide seedimisel, DNA raamatukogu ehitamisel, PCR-il, antikehade valmistamisel, Western blot hübridisatsiooni analüüsil, geenikiibil, kõrgel - läbilaskevõime sekveneerimine ja muud katsed.
Võõrastega seotudDNA isolatsioonikomplektid
Loomakoe DNA isolatsioonikomplekt- Genoomse DNA kiire ekstraheerimine ja puhastamine mitmest allikast, näiteks loomsetest kudedest, rakkudest jne.
Vere DNA Midi komplekt (1-5 ml)--Kvaliteetse genoomse DNA kiire puhastamine antikoaguleeritud verest (1-5 ml).
Bukaalne tampooni/FTA kaardi DNA isolatsioonikomplekt-- Puhastage kiiresti kõrgekvaliteediline genoomne DNA bukaalsest tampooni/FTA kaardi proovidest.
Taime DNA isolatsioonikomplekt-- Taimeproovidest (sh polüsahhariididest ja polüfenoolidest taimeproovidest) kiiresti puhastada ja saada kvaliteetne genoomne DNA
③ Plasmiidi ekstraheerimine
Plasmiid on omamoodi ringikujuline väikese molekuliga DNA rakkudes, mis on DNA rekombinatsiooni tavaline kandja.Plasmiidi ekstraheerimise meetod seisneb RNA eemaldamises, plasmiidi eraldamises bakteriaalsest genoomsest DNA-st ning valgu ja muude lisandite eemaldamisest, et saada suhteliselt puhas plasmiid.
General Plasmid Mini Kit--Kvaliteetse plasmiidse DNA kiire puhastamine transformeeritud bakteritest rutiinsete molekulaarbioloogiliste katsete jaoks, nagu transformatsioon ja ensüümi seedimine
④ Muud ekstraheerimistüübid, miRNA ekstraheerimine jne.
Loomade miRNA isolatsioonikomplekt- Kiiresti ja tõhusalt eraldada erinevatest loomsetest kudedest ja rakkudest väikesed 20-200 nt miRNA, siRNA, snRNA RNA fragmendid
Ⅳ Nõuded nukleiinhapete ekstraheerimisele ja puhastamise tulemuseles
① Nukleiinhappe primaarstruktuuri terviklikkuse tagamiseks.
② Vähendage valkude, suhkrute, lipiidide ja muude makromolekulide mõju
③ Nukleiinhappeproovides ei tohiks olla orgaanilisi lahusteid ega metalliioone, mis võivad ensüümi inhibeerida.
④ RNA ja muu nukleiinhappega saastumine tuleks DNA ekstraheerimisel kõrvaldada ja vastupidi.
Postitusaeg: 24.11.2022
